1924年黄埔军校在广州成立，为了能够让这所学校办下去，蒋介石为这所学校引进了五十多名教师，而且个个都非常出色，其中就有周恩来。不过周恩来讲课的方法与其他人很不同，他在教授学生理论的时候，就会将中国的情况与国际相结合，让一些晦涩难懂的问题，变得更加容易理解，所以只要是他的课堂都挤满了学生。
不过周恩来的方法自然也就受到了蒋介石的关注，所以他们接触的机会就比较多，而且两个人也慢慢熟悉了。1924年，在一次军事演习中，周恩来是作为政治主任参加的，他在看完军事演习之后，就直接向蒋介石提出了建议，他觉得应该讲政治直接融入到军事训练当中，这有利于部队的发展，而蒋介石也同意了。
不过在两个人深入了解对方后，他们对教育上的不同看法也就显露出来，1925年在军校扩张后，就政治课的多少问题让蒋介石与周恩来产生了分歧，因为周恩来是重视政治教育，可是蒋介石却觉得应该讲政治课减少，多进行军事方面的训练。后来还是孙中山出面，找到了一个折中的方法，才让他们二人达成共识。
不过在之后的时间里，周恩来也利用自己的知识与教学能力，培养出了不少出色的军事人才，这其中就有陈赓，还有叶剑英等人，他们的军事知识不仅扎实，就连政治观念也得到了正确的树立，这对于他们日后的革命之路选择有很大的帮助。在黄埔军校任职的时候，周恩来可是非常用心教授学生，虽然教师人数没有那么多，可是周恩来却坚持通宵备课，这一点就连蒋介石都对他敬佩不已。因为周恩来所表现出的就是一种负责任的态度。
1926年的中山舰事件让蒋介石差点就命丧黄泉，好在有周恩来的果断决策能力还有政治智慧，才让蒋介石得以幸免。当时蒋介石所处的国民党分为左右两派，而左派同苏联方面比较好，蒋介石是右派的代表自然也就与他们是对立的。
苏联这边撺掇左派扣押蒋介石，好在蒋介石提前得到消息，就将这件事告诉了周恩来，而周恩来也很快就采取了行动，这才避免不好的事情发生，不过这也推动了北伐战争。对于周恩来的能力，蒋介石也是赞不绝口，不过中山舰事件也让广州的局势更加的复杂。
1927年在北伐战争进行的关键时刻，蒋介石竟然发动四一二政变，不少共产党员遭到了蒋介石的绞杀，这也让国共合作破裂，周恩来与蒋介石不是同一路人，自然也就分道扬镳了。1927年的南昌起义就是周恩来与贺龙一起领导的，蒋介石得知后，就派出了不少的国民党镇压，起义虽然没有成功，不过却也是共产党武装革命的开始，对之后的战斗有非常大的影响。
1928年周恩来在参加莫斯科的共产会议时，他就同蒋介石的斗争进行了仔细的分析，他说蒋介石是比较擅长利用国内外矛盾的，不管是军事还是政治方面他都是有自己的一套，从这里可以看出周恩来对蒋介石也是有一定了解的，评价也挺高的。
不过在与国民党的多次反围剿作战中，周恩来也彻底明白蒋介石不管是政治方面还是军事上能力都很强，而周恩来虽然政治与军事能力也不差，可是想要将蒋介石打败就需要有更强领导能力还有眼光深远的人才可以，而这一点毛主席就具备，后来共产党也就是在毛主席的领导下才能够取得胜利，这也就看出想要战胜蒋介石，只有毛主席才有这样的能力，而这也需要周恩来等能力出色人的辅助。
