作者：宠物医师网
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一、摘要
一只成年家猫（短毛猫）感染了猫白血病病毒，由于肾功能衰竭和逐渐加重的贫血被转诊，该猫需要进行输血治疗。
在不同时间点采用免疫层析试纸条对其进行了ABC血型检测，并采用胶柱法进行了主要和次要交叉配血测试，同时测定了抗A和抗B抗体效价。
所有时间点，受血猫的免疫层析试纸条上均未出现明确的A或B条带。受血猫的血浆对检测的A型和B型猫的红细胞均表现出凝集反应。受血猫的红细胞与1只A型猫和2只B型猫的血浆相容，但与另一只A型猫的血浆不相容。受血猫的基因分型显示其为单一纯合c.179G>T CMAH变异，预测其为B型血。
这些研究表明，受血猫可能具有一种不常见的弱B型，或完全缺失所有ABC抗原，类似于人类ABO血型系统中极为罕见的孟买血型。
关键词：同种抗体，血型检测，孟买血型，交叉配血，猫，H抗原
二、引言
猫血型抗原系统将猫分为A型、B型或C型（也称为AB型）。超过3个月龄的B型猫存在抗A抗体，可能引发潜在的致命性急性溶血反应和新生儿同种溶血性贫血。1,2
ABC血型的分布各异，其中A型最为常见。3,4 红细胞（RBC）膜上的血型抗原决定因子为A型的N-羟乙酰神经氨酸（NeuGc）和B型的N-乙酰神经氨酸（NeuAc）。5,6
血型由编码胞苷单磷酸-N-乙酰神经氨酸羟化酶（CMAH）的基因变异决定，该酶负责将NeuAc转化为NeuGc。4 因此，B型猫仅表达NeuAc，而A型猫主要表达NeuGc，而C型猫在红细胞膜上大约具有等量的NeuAc和NeuGc。3
孟买血型是人类中一种极为罕见的血型，主要分布在东南亚，在欧洲的发生率约为百万分之一。该血型的特点是红细胞上缺乏H抗原。由于H抗原是形成A和B抗原的底物，缺乏该抗原的个体无法产生A或B抗原，因此在常规ABO表型检测中显示为O型，不论其ABO基因型为何。7-9
在本病例报告中，描述了一只家猫血型研究的结果，该猫表现出类似于极为罕见的孟买血型或一种弱B型的特征。
三、病例记录
一只4.5岁的已绝育雄性家猫（短毛猫）被转诊至希腊Aristotle大学兽医学院伴侣动物诊所。该猫已有3周逐渐加重的厌食、嗜睡、口臭和呕吐病史。入院时的体格检查显示，该猫体况较差（评分2/5）、中度贫血、嗜睡、舌背部存在溃疡性病灶，以及左侧收缩期IV/VI级杂音。
全血细胞计数及血涂片检查显示为正色素性、红细胞性、非再生性贫血。
网织红细胞为5400/μL（RI：<80 000/μL）；HCT为16%（RI：30%-45%）；伴有中性粒细胞增多29 400/μL（RI：3000-13 400/μL）和中度血小板减少症102 000/μL（RI：300 000-800 000/μL），血涂片上可见少量血小板聚集体。
血清生化检查
肌酐浓度升高（6.1 mg/dL，RI：0.7-1.6 mg/dL）、尿素氮升高（117 mg/dL，RI：9-32 mg/dL）、无机磷升高（10.1 mg/dL，RI：3.5-6.7 mg/dL）。
尿液分析
固定比重尿（1.012，入院前曾给予晶体液）、尿蛋白/肌酐比为1.8（RI：<0.4）、尿沉渣无活跃成分；尿培养未发现细菌。动脉血压正常。
酶联免疫吸附试验
进行血清学检测，结果显示猫白血病病毒（FeLV）抗原阳性，猫免疫缺陷病毒（FIV）抗体阴性。
腹部超声检查
提示左肾皮质增厚，皮髓质交界模糊，右肾外观正常。
因可能为严重的慢性肾病（基于国际肾脏病分级为IV期，伴蛋白尿），该猫被收治入院。CBC动态监测显示贫血加重（入院第3天HCT降至13%），需进行输血治疗。
使用免疫层析试纸条进行血型检测。意外的是，试纸条上未出现明确的A或B条带，仅对照条带清晰可见（图1）。重复使用同一ICS试纸条进行两次血型检测，包括一次用全血离心去除血浆后的浓缩红细胞进行测试，结果相同（图1）。此外，还进行了一次玻片反向血型检测，将两滴患者血清与一滴A型参考红细胞（BSA Animal Blood Bank, Porto, Portugal）混合后，观察到明显凝集（图2）。
图1 使用免疫层析试纸对猫的全血（1、2）和经过血浆分离后浓缩的红细胞（3）进行院内血型检测。对照带清晰可见，但未见明显的A或B带。
图2 玻片血型检测：将2滴受血猫的血清与1滴A型参考红细胞混合后，可见明显的凝集现象。
患猫接受了促红细胞生成素、等渗液体及其他支持治疗，但其临床状况和实验室指标恶化，导致主人在入院一个月后决定实施安乐死，未获得尸检许可。
由于血型检测结果异常，将两份剩余的EDTA抗凝血样送至ICS试纸条制造商进行进一步评估。更换不同批次的ICS试纸条后，仍无法检测出A或B型。基于胶柱法交叉配血测试进行的主要和次要交叉配血显示，受血猫的血浆与来自两只A型和两只B型供血猫的红细胞样本均出现凝集（图3）。
图3 使用受血猫血浆与A型（2只猫）或B型（2只猫）红细胞进行主要交叉配血试验。在所有情况下均观察到类似的凝集模式。
使用两只A型和两只不同B型供血猫的红细胞与受血猫血浆进行抗A和抗B同种抗体效价测定，结果显示抗A效价最高达1/32稀释度，抗B效价最高达1/4稀释度（图4）。
图4 上半部分：使用交叉配血试验和受血猫血浆的连续稀释液对抗A同种抗体进行滴度测定，与2只A型猫的红细胞配血，稀释至1/32时仍显示阳性反应。下半部分：使用交叉配血试验和受血猫血浆的连续稀释液对抗B同种抗体进行滴度测定，与2只B型猫的红细胞配血，稀释至1/4时仍显示阳性反应。
当使用两只B型猫的血浆与受血猫红细胞进行交叉配血时，显示为阴性（相容）；而用一只A型猫血浆时也显示阴性（相容），但用另一只A型猫血浆时则显示阳性（不相容；图5）。
对4种CMAH基因变异进行基因分型分析（使用冷冻EDTA抗凝血样），结果显示其为单一纯合c.179G>T CMAH变异，预测为B型血。10
图5 使用受血猫红细胞与A型猫血浆进行次要交叉配血试验，其中一只A型猫显示阳性（不兼容）反应（1），而另一只A型猫（2）及两只B型猫（3）的血浆均显示阴性（兼容）反应。
四、讨论
本文报告了一例在院内血型检测中未能检测出A或B抗原的猫。尽管基因检测证实该猫为bb基因型，携带导致土耳其家猫及其他品种呈现B型血的CMAH基因c.179G>T变异，但免疫层析试纸（ICS）多次检测及使用浓缩红细胞的测试未能识别其血型为A、B或C（AB），提示可能为“空白型”（即红细胞上既无NeuAc也无NeuGc）。10,11 同时，该猫血浆中可检测到抗A（1/32）和抗B（1/4）同种抗体。这表明NeuAc可能未被吸收或合成，同时CMAH酶也发生突变，暗示CMAH可能已转变为一种不同于NeuAc或NeuGc的前体抗原。这些血型检测结果与一种不常见的“弱B型”或类似人类ABO血型系统中极其罕见的孟买型（Bombay型）有相似之处，尽管尚未在猫中鉴定出类似H抗原的前体底物。8,9
在人类孟买血型中，由于红细胞缺乏形成A和B抗原所需的H抗原，即使ABO基因型不为O，ABO检测也会表现为O型。当其红细胞与抗A或抗B试剂匹配时，不会发生凝集，但此类个体会产生对A和B红细胞抗原以及H抗原的抗体，且需接受不含H抗原的血液。本例猫因技术限制，未能进行针对前体底物的测试。
人类ABO血型系统中少见的变异包括弱A和弱B亚型。这些亚型的红细胞上A或B抗原减少，与抗A或抗B抗体的凝集程度存在差异。一些弱B型可能与ABO基因CBF/NF-Y调控区的序列变异有关。12 少部分弱A或B亚型个体血浆中含有抗A或抗B抗体，类似于本病例中观察到的情况。13
猫中基因型与表型的血型不一致较为罕见，但既往报道与本病例有所不同。10,11,14最近研究假设猫的红细胞上可能存在除ABC血型系统外的5种抗原，其中一种可能与此前描述的Mik抗原相对应。15,16一项猫研究中发现，4只患有FeLV相关贫血的A型家猫被误检测为AB型，即使在消除弱自身凝集后仍出现这一结果。这可能是B抗原在红细胞表面的抗原模拟或A型猫中NeuAc转化为NeuGc的CMAH活性下降所致。18
本病例中的猫为FeLV阳性，尚不清楚这是否影响其抗原表达和同种抗体效价。一项多中心研究中未发现FeLV或FIV感染状态与血型分布的关联，也未观察到健康与患病猫之间血型分布的差异。19然而，该研究中FeLV抗原阳性猫的样本量较小（n=47），可能影响结果的有效性。
历史数据显示，本病例中使用的ICS试纸能可靠检测贫血及非贫血猫的ABC血型。一项研究显示，ICS试纸对A型和B型的诊断敏感性分别为97.7%和95.7%，特异性分别为100%和97.1%。另一项研究则发现其对所有血型的敏感性和特异性均为100%。但由于主人选择安乐死，本例无法采集更多新鲜血样，使用其他方法（如传统的金标准试管法、胶柱法、流式细胞术或小麦胚芽凝集素）重复检测。3,18,20-22
综上所述，本例家猫的血型检测结果、反向血型检测、交叉配血结果及基因型分析与人类ABO血型系统中极罕见的孟买型类似，尽管猫中尚未发现类似H抗原的底物抗原。同时，也不能排除类似人类“弱B型”的可能性，其红细胞上的B抗原密度较低，导致常规血型检测方法无法识别。
五、参考文献
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来源:JVIM
翻译|张帆 张秋雁
编辑|张秋雁
审核|郭羽丽
